小鼠腦膜組織提取物培養

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產(chǎn)品描述：
小鼠腦膜組織提取物【Brain: Normal Mouse Meningeal Derivatives】
     小鼠腦膜組織提取物培養腦膜組織由外向內由硬網(wǎng)膜、蛛網(wǎng)膜和軟腦膜組成。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍小鼠腦膜組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的*條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA*鏈，以50ul總反應體系進(jìn)行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應用： <>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。
技術(shù)傳授:
凍存培養基
小鼠腦膜組織提取物培養凍存細胞時(shí)必須使用的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含0% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約00-200×g的離心力將細胞懸液離心5至0分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  °C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
以下是小鼠腦膜組織提取物培養的相關(guān)產(chǎn)品：

兔抗CXorf36多克隆抗體 英文名：Anti-CXorf36 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗CYP46A多克隆抗體 英文名：Anti-CYP46A rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗CYP26多克隆抗體 英文名：Anti-CYP26 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗PTGIS多克隆抗體 英文名：Anti-PTGIS rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗CSTB多克隆抗體 英文名：Anti-CSTB rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗MT-CYB多克隆抗體 英文名：Anti-MT-CYB rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗AAM多克隆抗體 英文名：Anti-AAM rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗AB2IP多克隆抗體 英文名：Anti-AB2IP rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗AP多克隆抗體 英文名：Anti-AP rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗RHOBTB2多克隆抗體 英文名：Anti-RHOBTB2 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗AH2多克隆抗體 英文名：Anti-AH2 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

兔抗X4多克隆抗體 英文名：Anti-X4 rabbit polyclonal antiboy 冷凍（-20℃） 避光

小鼠腦膜組織提取物培養Topotecan hydrochloride 鹽酸拓撲替康 943-54-6  20mg

鈣熒光探針Fura-2, AM mg  支

Pyruvic acid 丙酮酸 25g  瓶

Urea 尿素 500g  瓶

Arecoline hydrobromide 氫溴檳榔堿 300-08-3  50mg

30ml親和層析柱 (2.3×0) 30ml  個(gè)

中性樹(shù)膠 (切片標本永保藏封片劑) 00ml  瓶

Pregnenolone 孕甾烯醇酮 45-3-  20mg

Trizol 00ml  瓶

反轉錄酶 M-MLV 0000u  支

0.5mlPCR管，0盒/箱 000支  盒

細胞可重發(fā)跟不可重發(fā)：
可以重發(fā)的情況有哪些？
（）細胞運輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；
（3）存活的細胞靜置24小時(shí)后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；
（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封，出現污染，重發(fā)；
（5）視具體情況而定。
小鼠腦膜組織提取物培養出現問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（）客戶(hù)造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶(hù)不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）細胞狀態(tài)不好，未細胞培養前3天照片的，不重發(fā)；
（4）細胞培養時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（5）細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；