L Wnt-3A (小鼠皮下結締組織細胞)

L Wnt-3A (小鼠皮下結締組織細胞)

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗，不做其他科學(xué)實(shí)驗外的使用！

商品詳情：

別稱(chēng) L-Wnt-3A; L-Wnt3A; LWnt3A; LWnt-3A

種屬 小鼠

年齡（性別） 雄性，100日齡

組織來(lái)源 組織：皮下結締組織；疏松結締組織及脂肪；品系：C3H/An

生長(cháng)特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

背景描述：L Wnt-3A細胞是由L-M(TK-)細胞用Wnt-3A表達載體轉染并在含G418的培養基中篩選出的穩轉株。Wnt-3A基因編碼一個(gè)有變異的信號功效分泌性糖蛋白，Wnt基因控制胚胎發(fā)過(guò)程中的許多模式形成和生長(cháng)事件。L Wnt-3A細胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白，L Wnt-3A細胞是目前生產(chǎn)Wnt-3A條件培養基的最好來(lái)源。由于這種條件培養基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對于涉及Wnt-3A條件培養基的實(shí)驗有必要用其來(lái)源細胞株作對照。

生物安全等級 1

生長(cháng)培養基 DMEM＋0.4mg/ml G418＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達情況 Wnt-3A

細胞培養操作：

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過(guò)夜）。第三天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1 -3min（視細胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。

3) 細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無(wú)血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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細胞培養注意事項 ：

一、 收到細胞后首先觀(guān)察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

二、仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū)，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問(wèn)題，責任由 客戶(hù)自行承擔。

三、用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細胞狀態(tài)。因運輸問(wèn)題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀(guān)察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

四、貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的培養基重懸 細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進(jìn)行培養。

五、 請客戶(hù)用相同條件的培養基用于細胞培養。

六、 建議客戶(hù)收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸的原因，個(gè)別敏感細胞會(huì )出現不穩定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

七、該細胞僅供科研使用。

八、備注：運輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培 養條件新配制的培養基來(lái)培養細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

九、 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。