SK-BR-3 SKBR3 (人乳腺腺癌細胞)

細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

SK-BR-3 [SKBR3] (人乳腺腺癌細胞)

商品屬性

商品介紹

別稱(chēng) SK-Br-3; Sk-Br-3; SK BR 03; SKBR-3; SKBr-3; SK-BR3; SKBr3; SkBr3; SKBR3

種屬 人類(lèi)

年齡（性別） 女性，43歲

組織來(lái)源 乳腺；乳房；肋膜滲出液轉移灶

生長(cháng)特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

參考資料(來(lái)源文獻)

生物安全等級 1

生長(cháng)培養基 McCoy’s 5A＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時(shí)間 ~48-72小時(shí)

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in nude mice; forms poorly differentiated adenocarcinoma.

受體表達情況 Blood Type A; Rh+; HLA A11, Bw22 (+/-), B40, B18

注意事項 1. SK-BR-3細胞從冷凍保存中恢復的速度可能很慢。SK-BR-3細胞在低溫保存恢復過(guò)程中的附著(zhù)會(huì )很輕。這很正常。這種細胞系在培養的整個(gè)第一周以及每次繼代培養后都表現出松散的附著(zhù)和漂浮的細胞，這并不少見(jiàn)； 2. 如果存在大量漂浮物，尤其是在生長(cháng)的第一周，在啟動(dòng)復蘇后幾天內保持細胞不受干擾。如果仍然有很多漂浮物，用臺盼藍檢查生存能力。通過(guò)輕輕離心保留漂浮細胞，并在更換培養基時(shí)將其與附著(zhù)的細胞一起添加回同一培養容器中，這一點(diǎn)很重要。不要分離或丟棄漂浮細胞。細胞最初以小斑塊或細胞群的形式附著(zhù)，許多細胞團仍處于懸浮狀態(tài)。幾天后，生長(cháng)將從貼壁細胞群向外延伸。通常也會(huì )出現一些細胞碎片。漂浮細胞應始終通過(guò)溫和離心（125 x g，持續5至7分鐘）保留，并在換液或傳代后放回培養容器； 3. SK-BR-3細胞傾向于相互堆積。在細胞達到70-80%匯合度之前不要用消化處理細胞。如果讓細胞過(guò)度生長(cháng)，細胞就會(huì )分離漂浮。

細胞傳代培養操作步驟：

（1）當顯微鏡下細胞形態(tài)和生長(cháng)密度達到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

（2）吸棄培養液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養瓶放入37℃培養箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀(guān)察細胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養瓶使剩余細胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。

（5）細胞懸液吸至離心管內，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。

（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養瓶中，補充培養液并搖勻，放置37℃的CO2培養箱進(jìn)行培養。

（8）根據細胞生長(cháng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。

（9）細胞凍存

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。

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