小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物培養

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產(chǎn)品描述：
小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物【Mouse Brain: Normal Cerebral Venous Vascular Smooth Muscle Cells Derivatives】
     小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物培養小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物是從小鼠原代腦靜脈血管平滑肌細胞提取的，小鼠原代腦靜脈血管平滑肌細胞從正常小鼠腦組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA*鏈，以50ul總反應體系進(jìn)行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應用： <>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。
技術(shù)傳授:
凍存培養基
小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物培養凍存細胞時(shí)必須使用的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基，含0% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約00-200×g的離心力將細胞懸液離心5至0分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應不時(shí)輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  °C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
以下是小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物培養的相關(guān)產(chǎn)品：

TrkB / NTRK2 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

TrkB / NTRK2 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

CDC 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

TrkB / NTRK2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

SPARCL / MAST9 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

IL9R 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 µg

PLAUR / CD87 / uPAR 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

Defensin / Beta-defensin 3 / DEFB03 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µL

Cathepsin B / CTSB 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   IHC-P    50 µg

Sclerostin / SOST 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物培養3α-Hydroxysteroid Dehydrogenase 3α類(lèi)固醇脫氫酶 500U  瓶

Carbenicillin disodium 鈉 4800-94-6  00mg

Van Gieson 染色液（VG染色液） 500ml  瓶

L-Asparagine monohydrate L-天冬酰胺 70-47-3  200mg

NP-40 LYSIS BUFFER 裂解液 00ml  瓶

Pepsin :0000 :0000 25g  瓶

Cy5.5-N-羥基琥珀酰亞胺酯 mg  支

Solar Fluor 647（效果同Alexa Fluor 647） 5 mg  支

Microcystin-RR 微囊藻毒素RR 755-37-4  00μg

Sodium alginate 海藻酸鈉 25g  瓶

D-Hanks(不含鈣鎂,含酚紅) 500ml  瓶

細胞可重發(fā)跟不可重發(fā)：
可以重發(fā)的情況有哪些？
（）細胞運輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；
（3）存活的細胞靜置24小時(shí)后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；
（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封，出現污染，重發(fā)；
（5）視具體情況而定。
小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物培養出現問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（）客戶(hù)造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶(hù)不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）細胞狀態(tài)不好，未細胞培養前3天照片的，不重發(fā)；
（4）細胞培養時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（5）細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；