人椎間盤(pán)髓核細胞提取物培養

注意事項：
. 接收到人椎間盤(pán)髓核細胞提取物培養，肉眼觀(guān)察細胞培養基顏色，顯微鏡觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議收到時(shí)的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴格無(wú)菌操作，打開(kāi)細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶?jì)鹊呐囵B基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀(guān)察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。 

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人椎間盤(pán)髓核細胞提取物【Human Intervertebral Disc: Normal Nucleus Pulposus Cell Derivatives】
     人椎間盤(pán)髓核細胞提取物培養人椎間盤(pán)髓核細胞提取物是從人椎間盤(pán)髓核細胞提取的，人椎間盤(pán)髓核細胞從正常人椎間盤(pán)髓核組織制備。正常人椎間盤(pán)髓核組織采集自各地方醫院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA*鏈，以50ul總反應體系進(jìn)行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應用： <>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。?

ERCC8 / CSA 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IF   ICC/IF   50 µg

IL-27 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

FOXJ 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

CD3 / PECAM 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM    25 Test

TUBG 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

UBE2D / UBCH5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB    50 µg

PFD2 / PFDN2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB   IP   50 µg

TNFRSFA 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

CD9 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

PI3 / Elafin / WFDC4 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

人椎間盤(pán)髓核細胞提取物培養專(zhuān)藍5號鈉鹽英文名稱(chēng)：Patent blue 5分子式：582.66分子量： C27H3N2NaO7S2：20262-76-4

表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酯英文名稱(chēng)：Epigallocatechin-3-gallate分子式：458.3772分子量：C22H8O：989-5-5

8-姜酚英文名稱(chēng)：8- ginger phenol分子式：322.44分子量： C9H30O4：30462-35-2

8-硝喹哪分子式：88.9英文名稱(chēng)：8- nitro group：88-07-2分子量： C0H8N2O2

2--5-三氟分子式：287.02英文名稱(chēng)：2- amino -5- three f：97760-97-9分子量： C7H5F3IN

2,6-二氯三氟甲分子式：英文名稱(chēng)：2,6- two CL three：分子量：

6--2-甲喹啉分子式：58.2英文名稱(chēng)：6- amino -2- methyl group：65079-9-8分子量： C0H0N2

,5-萘二磺鈉英文名稱(chēng)：,5- naphthalene two sulfonic acid分子式：332.25334分子量： C0H6Na2O6S2：655-29-4

2--3-氟吡分子式：22.英文名稱(chēng)：2- cyano -3- fluorine pyridine：97509-75-6分子量： C6H3FN2

,2-二溴乙分子式：263.96英文名稱(chēng)：,2- styrene dibromide：93-52-7分子量： C8H8Br2

培養步驟：
人椎間盤(pán)髓核細胞提取物培養對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。