乳腺癌細胞；MDA-MB-453操作步驟:

1、貼壁細胞的消化

①吸除培養液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀(guān)察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實(shí)驗。

④如果發(fā)現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現細胞消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養器皿底部脫落， 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實(shí)驗。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

實(shí)驗要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長(cháng)狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過(guò)大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長(cháng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。